TDAG8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-416613-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TDAG8 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- TDAG8ダブルニカースプラスミド（h）およびTDAG8ダブルニカースプラスミド（h2）は、GPR65を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TDAG8 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-416613-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TDAG8 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-416613-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのGPR65はTDAG8（プロトン感知性Gタンパク質共役受容体）をコードしており、免疫系および造血系の文脈で豊富に発現し、細胞外のアシドーシスに応答して主としてGsとcAMPシグナル伝達に共役します。TDAG8は炎症性微小環境におけるpH依存的な刺激を統合し、白血球の活性化、サイトカインプログラム、細胞生存の意思決定に影響を与えるとともに、MAPKや転写応答を調節するより広範なGPCR駆動性経路とも交差します。GPR65の制御異常は、組織アシドーシスと免疫シグナルの破綻を特徴とする病態（炎症・自己免疫の状況や腫瘍微小環境の生物学を含む）において検討されてきました。これらの特性により、TDAG8は、細胞外pHがどのようにシグナル伝達ネットワークや免疫細胞の挙動を再構成するのかを研究するための有用な切り口となります。
TDAG8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GPR65 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GPR65内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GPR65の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GPR65が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。