Tctex1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402886-ACT

ヒトDYNLT1は、細胞質ダイニンと複合体を形成して微小管依存性輸送、オルガネラの配置、細胞内輸送を担うダイニン軽鎖であるTctex1をコードしている。ダイニン–ダイナクチン運動複合体内での相互作用を介して、Tctex1は細胞極性や細胞分裂を形作る、有糸分裂紡錘体の組織化、中心体機能、ならびにカーゴ輸送などの過程に寄与する。DYNLT1依存的な輸送は、タンパク質局在の制御やシグナルの区画化を通じて、神経系および線毛の生物学とも関連づけられている。ダイニン関連輸送経路の制御異常は、神経変性の機序や増殖状態の変化との関連でしばしば研究されており、そのためDYNLT1は細胞骨格ダイナミクスとシグナル伝達の帰結を調べる上で有用な結節点となる。

Tctex1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DYNLT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tctex1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DYNLT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDYNLT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tctex1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDYNLT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTctex1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDYNLT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTctex1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。