TCF-19 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404549-ACT

TCF19 (TCF-19) é um fator de transcrição nuclear implicado na regulação da progressão do ciclo celular e de programas transcricionais ligados à proliferação, com atividade descrita em regiões promotoras de genes envolvidos na replicação do DNA e no controle de checkpoints. É expresso em contextos proliferativos e tem sido associado a vias que governam a entrada na fase S e a regulação gênica dependente da cromatina. Alterações na expressão de TCF19 foram observadas em diversos cenários relevantes para doenças, incluindo assinaturas transcriptômicas de câncer e fenótipos relacionados ao sistema imune, sugerindo papéis no controle do crescimento e na adaptação ao estresse celular. Essas características tornam o TCF19 um alvo útil para dissecar redes transcricionais que coordenam a proliferação, a manutenção do genoma e a expressão gênica específica do contexto.

TCF-19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TCF19 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TCF-19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TCF19 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TCF19, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TCF-19. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TCF19 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TCF-19 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TCF-19 em células tumorais com expressão de TCF19 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.