TBX5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423282

Panoramica

Tbx5 codifica il fattore di trascrizione della famiglia T-box TBX5, un regolatore del legame al DNA specifico per sequenza che coordina programmi genici dello sviluppo controllando la patterning dell’arto anteriore e la morfogenesi cardiaca nel topo. TBX5 si integra con reti trascrizionali fondamentali che coinvolgono NKX2-5, GATA4 e i fattori della famiglia MEF2 per modulare l’attività degli enhancer e la specificazione di linea nei tessuti derivati dal mesoderma. La sua attività influenza vie che regolano la formazione delle camere cardiache, lo sviluppo del sistema di conduzione e la differenziazione dei cardiomiociti, e alterazioni del dosaggio di Tbx5 sono associate a fenotipi di malformazioni congenite del cuore e degli arti. In quanto regolatore dello sviluppo con bersagli dipendenti dal contesto, TBX5 è ampiamente utilizzato per studiare il controllo trascrizionale dell’organogenesi e le decisioni di destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TBX5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tbx5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tbx5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tbx5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TBX5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tbx5 per lo studio della segnalazione di TBX5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tbx5 critici per la funzione di TBX5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tbx5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TBX5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TBX5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tbx5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TBX5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TBX5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tbx5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tbx5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.