TBX4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405242-NIC

TBX4はT-boxファミリーに属する転写因子をコードしており、保存性の高いT-boxドメインを介してDNAに結合し、胚性間葉系の分化、四肢パターニング、器官形成を制御する遺伝子発現プログラムを調節します。ヒトの発生においてTBX4の活性はWNT、BMP、FGFのシグナル伝達ネットワークと統合され、前駆細胞の運命決定と組織形態形成を協調的に制御します。TBX4機能の異常な調節は、四肢形成異常や肺血管疾患を含む先天性の発生表現型に関与するとされ、発生経路の転写制御を研究する上で重要な標的となります。核内の制御因子としてTBX4は、適切な細胞モデルにおいてエンハンサー‐プロモーターの制御ロジック、系譜決定、下流の転写回路を解析するための扱いやすい結節点（ノード）を提供します。

TBX4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TBX4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TBX4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TBX4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TBX4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。