Plásmido CRISPR de Activación (h) TBX3: sc-400754-ACT

TBX3 codifica un factor de transcripción de la familia T-box que regula el patrón del desarrollo, las decisiones de destino celular y la morfogénesis tisular mediante la unión al ADN dependiente de secuencia y la represión o activación transcripcional. En células humanas, TBX3 se integra en programas de crecimiento y diferenciación, intersectando con vías que controlan la proliferación, la senescencia, la dinámica epitelio‑mesénquima y la especificación de linaje. La expresión desregulada de TBX3 se ha vinculado a fenotipos del desarrollo alterados y se ha estudiado por sus funciones en redes transcripcionales oncogénicas que influyen en el control del ciclo celular y en rasgos metastásicos. Como regulador nuclear, TBX3 se investiga habitualmente mediante ingeniería genómica y perfilado del transcriptoma para cartografiar dianas aguas abajo y programas transcripcionales dependientes del contexto.

TBX3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TBX3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TBX3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TBX3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TBX3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TBX3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TBX3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TBX3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TBX3 en células tumorales con expresión de TBX3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.