TBC1D15 Double Nickaseプラスミド (h): sc-413036-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TBC1D15 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- TBC1D15ダブルニカースプラスミド（h）およびTBC1D15ダブルニカースプラスミド（h2）は、TBC1D15を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TBC1D15 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-413036-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TBC1D15 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-413036-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TBC1D15は、膜輸送やオルガネラ動態の制御に関与するRab GTPase活性化タンパク質（RabGAP）をコードしており、とりわけミトコンドリア‐小胞体接触部位で重要な役割を担います。Rab依存的な小胞輸送を調節し、輸送過程をミトコンドリア形態と連動させることで、TBC1D15はミトコンドリア分裂、マイトファジー、細胞の代謝適応といったプロセスに寄与します。これらの経路の制御異常はストレス応答や増殖プログラムと関連するため、TBC1D15はオルガネラの品質管理がシグナル伝達やバイオエナジェティクスとどのように交差するかを解明するうえで有用な標的です。生物医学研究では、TBC1D15を撹乱することで、ミトコンドリア恒常性、細胞内輸送、ならびにがんや神経変性疾患モデルにおける関連表現型に関する機序研究が可能になります。
TBC1D15 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TBC1D15 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TBC1D15内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TBC1D15の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TBC1D15が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。