TARDBP Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-433014-LAC

Mouse Tardbp codifica TARDBP (TDP-43), una proteina legante RNA/DNA espressa in modo ubiquitario che regola lo splicing del pre‑mRNA, il trasporto dell’RNA, la stabilità dell’mRNA e la biogenesi dei microRNA. TARDBP partecipa alle vie del metabolismo dell’RNA e alla dinamica dei granuli da stress, e trasloca tra nucleo e citoplasma per coordinare programmi di espressione genica legati al mantenimento neuronale e all’omeostasi cellulare. Alterazioni dei livelli o della localizzazione di TARDBP sono associate a cambiamenti nell’elaborazione dell’RNA, a squilibri della proteostasi e a risposte disregolate allo stress cellulare. Queste caratteristiche rendono Tardbp un bersaglio di ricerca centrale negli studi sulle reti di proteine leganti l’RNA, sui meccanismi rilevanti per la neurodegenerazione e sulla regolazione dell’intero trascrittoma.

Le particelle di attivazione lentivirale TARDBP (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Tardbp in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TARDBP (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Tardbp, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TARDBP. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Tardbp e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.