TARDBP CRISPR Activationプラスミド (m): sc-433014-ACT

マウスのTardbpは、転写、pre-mRNAスプライシング、mRNAの安定性、輸送、ストレス顆粒の動態を制御する多機能なRNA／DNA結合タンパク質であるTARDBP（TDP-43）をコードします。TARDBPは、神経細胞の分化、シナプス機能、プロテオスタシスに影響するRNA代謝プログラムを統括し、厳密な発現恒常性を維持する自己調節性のフィードバックにも関与します。TARDBPの局在やRNA結合活性が破綻すると、リボ核タンパク質複合体の形成が乱れ、細胞骨格の構築やミトコンドリア機能に関与する遺伝子の発現が変化し得ます。TARDBPの異常は、RNAプロセシングの変調やタンパク質凝集経路など、神経変性に関連する機序と強く結び付いており、マウス系で疾患関連の細胞表現型をモデル化するうえで重要なハブとなります。

TARDBP CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Tardbpの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TARDBP CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Tardbp 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTardbp転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TARDBPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTardbp遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTARDBP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTardbp発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTARDBP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。