TAP1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405210-NIC

TAP1 (transportador associado ao processamento de antígenos 1) codifica um transportador da família ABC (ATP-binding cassette) que forma um heterodímero com TAP2 para translocar peptídeos derivados do proteassoma do citosol para o retículo endoplasmático, onde são carregados em moléculas de MHC classe I. Esse processo é central para o processamento e a apresentação de antígenos, conectando a sinalização estimulada por interferon, a atividade do imunoproteassoma e a função do complexo de carregamento de peptídeos no RE à vigilância imunológica mediada por linfócitos T CD8+. Alterações na expressão ou na função de TAP1 estão associadas à apresentação deficiente de MHC I na superfície celular e a fenótipos de evasão imune observados em diversos contextos tumorais, além de características de imunodeficiência primária em raros defeitos de apresentação de antígenos. Assim, TAP1 é frequentemente estudado em vias que regulam interações hospedeiro–patógeno, imunologia tumoral e mecanismos que controlam a montagem e o tráfego do MHC I.

TAP1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus TAP1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de TAP1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função TAP1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com TAP1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.