TAL1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423261-ACT

マウス Tal1（TAL1；T細胞性急性リンパ性白血病タンパク質1）は、E-boxモチーフに結合する塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子をコードしており、GATA因子、LMOコファクター、Eタンパク質とともに多タンパク質複合体を形成して、系譜特異的な遺伝子発現を制御します。TAL1は造血系の運命決定と赤血球系成熟の主要な制御因子であり、細胞運命のコミットメント、増殖、分化に関わるプログラムを形作ります。造血ネットワークの転写制御を通じて、TAL1は発生シグナルとクロマチン制御を統合し、適切な血球発生を維持します。TAL1活性の破綻は異常造血と関連し、白血病化に関わる転写回路や幹／前駆細胞生物学のモデルにおいて広く研究されています。

TAL1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Tal1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TAL1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Tal1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTal1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TAL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTal1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTAL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTal1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTAL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。