Tak1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400364-ACT

ヒトのMAP3K7は、トランスフォーミング増殖因子β（TGF-β）活性化キナーゼ1（TAK1）をコードしており、TAK1はMAP3Kとして、炎症性サイトカイン、Toll様受容体およびIL-1受容体、ならびにTGF-βファミリーリガンドからのシグナルを統合します。TAK1は下流のNF-κBおよびMAPKカスケード（p38、JNK、ERK経路を含む）を活性化し、自然免疫応答、アポトーシス、ストレス適応を制御する転写プログラムを調節します。ユビキチン依存性のシグナル伝達複合体における役割や、キナーゼによるリン酸化イベントを介して、TAK1は多様な組織環境で細胞運命の決定に影響を与えます。MAP3K7/TAK1シグナルの破綻は、NF-κB/MAPK活性の変化によって生存・サイトカインネットワークが再構築される炎症性病態や腫瘍形成過程に関与すると示唆されています。

Tak1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAP3K7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tak1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAP3K7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAP3K7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tak1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAP3K7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTak1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAP3K7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTak1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。