TACE/ADAM17 Plasmide Double Nickase (h): sc-400827-NIC

ADAM17, noto anche come TACE, è una metalloproteasi ancorata alla membrana che catalizza lo “shedding” dell’ectodominio di numerose proteine di superficie cellulare, tra cui TNF, ligandi di EGFR (ad es. TGF-α e amfiregulina) e diverse molecole di adesione e recettori. Attraverso questo processamento proteolitico, TACE/ADAM17 modella la segnalazione infiammatoria, l’attivazione della via EGFR/MAPK e la comunicazione cellula–cellula, influenzando proliferazione, sopravvivenza e reclutamento di cellule immunitarie. L’attività di ADAM17 è strettamente regolata dalla maturazione nella via secretoria e dal traffico alla membrana plasmatica, e partecipa a risposte coordinate a citochine, stress e fattori di crescita. Uno shedding dipendente da ADAM17 deregolato è stato implicato nell’infiammazione cronica, nella segnalazione associata al cancro, nel rimodellamento cardiovascolare e nei processi neuroinfiammatori, rendendolo un bersaglio frequente negli studi meccanicistici sulla disponibilità di recettori/ligandi e sulla dinamica delle vie di segnalazione a valle.

TACE/ADAM17 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADAM17 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADAM17. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADAM17. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADAM17 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.