TAB3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404049-ACT

ヒトTAB3（TAK1結合タンパク質3）は、TAB/TAK1シグナル伝達モジュールの足場（スキャフォールド）兼制御成分であり、上流の受容体刺激やストレス刺激をNF-κBおよびMAPK経路の活性化へと結び付けます。パターン認識受容体やサイトカインシグナル伝達の下流でキナーゼ複合体の組み立てを調整することにより、TAB3は炎症応答、細胞生存、ストレス適応を制御する転写プログラムの形成に寄与します。TAK1依存性ネットワークを介するシグナル伝達の破綻は、慢性炎症や腫瘍性シグナル伝達の文脈で関与が示唆されており、TAB3は経路の配線やフィードバック制御の解明において重要です。そのためTAB3の発現と機能は、自然免疫シグナル伝達、シグナル伝達経路間のクロストーク、刺激依存的な転写調節に関する研究で一般的に検討されています。

TAB3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TAB3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TAB3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TAB3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTAB3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TAB3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTAB3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTAB3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTAB3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTAB3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。