Synaptotagmin XI CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404323-ACT

SYT11は、細胞内膜輸送や小胞動態の調節に関与するとされるシナプトタグミンファミリーの一員であるヒトSynaptotagmin XI（シナプトタグミンXI）をコードします。シナプトタグミンXIは、エキソサイトーシスおよびエンドサイトーシス後のリサイクリングの制御に関連づけられており、神経細胞や他の分泌細胞種におけるシナプス小胞のターンオーバーや、より広範な分泌経路のプロセスに影響を与えます。小胞のドッキング、融合能、オルガネラ恒常性への作用を通じて、SYT11は神経伝達、自食（オートファジー）—リソソーム機能、ならびに細胞ストレス応答を制御する経路と交差し得ます。SYT11の発現変化や遺伝的多型は、神経変性および神経炎症に関する研究文脈で関連が報告されており、神経細胞の脆弱性やシナプス機能不全の機序を研究する上での指標としての有用性が示唆されます。

Synaptotagmin XI CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SYT11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Synaptotagmin XI CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SYT11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSYT11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Synaptotagmin XIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSYT11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSynaptotagmin XI依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSYT11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSynaptotagmin XI経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。