SUMO-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401111-ACT

ヒトSUMO2はSUMO-2をコードしており、SUMO-2はユビキチン様修飾因子として、標的タンパク質に共有結合的に付加される動的な翻訳後修飾サイクルを介して、タンパク質の安定性、細胞内局在、および高分子複合体の組み立てを調節します。SUMO-2依存的なSUMO化は、SUMO E1/E2/E3酵素カスケードと、SENPプロテアーゼによる協調的な脱SUMO化によって、DNA損傷シグナル伝達と修復、クロマチン構造、転写制御、ならびに細胞周期の進行に影響を与えます。SUMO-2はポリSUMO鎖を形成でき、SUMO標的ユビキチンリガーゼ（STUbL）と相互作用することで、SUMO化をプロテオスタシスやストレス適応応答と結び付けます。SUMO2活性の異常やSUMO化パターンの変化は、転写やゲノム維持のネットワークレベルの変動が関与するとされる、がん化シグナル、神経変性、炎症性ストレスの文脈でしばしば研究されています。

SUMO-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SUMO2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SUMO-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SUMO2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSUMO2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SUMO-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSUMO2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSUMO-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSUMO2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSUMO-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。