SUMO-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401111-ACT

SUMO2 umano codifica SUMO-2, un modificatore simile all’ubiquitina che viene coniugato covalentemente alle proteine bersaglio in un ciclo dinamico di modificazione post-traduzionale che regola la stabilità proteica, la localizzazione subcellulare e l’assemblaggio di complessi macromolecolari. La SUMOilazione dipendente da SUMO-2 influenza la segnalazione e la riparazione del danno al DNA, l’organizzazione della cromatina, il controllo trascrizionale e la progressione del ciclo cellulare tramite cascate enzimatiche SUMO E1/E2/E3 e una deSUMOilazione coordinata mediata dalle proteasi SENP. SUMO-2 può formare catene di poli-SUMO che interagiscono con ligasi dell’ubiquitina mirate a SUMO, collegando la SUMOilazione alla proteostasi e alle risposte adattative allo stress. Un’attività di SUMO2 deregolata e profili alterati di SUMOilazione sono spesso studiati in contesti di segnalazione oncogenica, neurodegenerazione e stress infiammatorio, in cui sono implicati cambiamenti a livello di rete nella trascrizione e nel mantenimento del genoma.

SUMO-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SUMO2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SUMO-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SUMO2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SUMO2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SUMO-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SUMO2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SUMO-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SUMO-2 nelle cellule tumorali con espressione di SUMO2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.