SULT1A1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-417793-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SULT1A1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SULT1A1ダブルニカースプラスミド（h）およびSULT1A1ダブルニカースプラスミド（h2）は、SULT1A1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: SULT1A1 抗体 (214E2Z): sc-517645
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SULT1A1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-417793-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SULT1A1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-417793-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトSULT1A1は、細胞質に局在する硫酸基転移酵素をコードしており、フェノール性の外来異物（ゼノバイオティクス）、内因性ホルモン、ならびに多様な低分子に対する硫酸抱合を触媒することで、それらの溶解性、生物学的利用能、クリアランスを変化させる。この第II相代謝酵素は、基質の種類や状況に応じて、排泄を促進し得る一方で反応性中間体を生じ得る硫酸エステルを生成することにより、化学物質の解毒および生体内活性化（バイオアクティベーション）過程に関与する。SULT1A1の活性は、抱合経路や代謝物処理の協調的な制御を介して、より広範なゼノバイオティクス応答ネットワークや酸化還元バランスとも結び付いている。SULT1A1の発現量や機能の変動は、薬物や発がん物質の代謝における個人差、ならびに化学物質誘発性の細胞ストレスに対する感受性との関連で研究されてきた。
SULT1A1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SULT1A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SULT1A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SULT1A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SULT1A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。