Stim1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401311-ACT

STIM1は、ストローマ相互作用分子1（Stim1）をコードしており、Stim1は小胞体のCa2+センサーとして機能する。これは、小胞体内カルシウムの枯渇をER–細胞膜接触部位におけるORAIチャネルの活性化へと結び付けることで、ストア作動性カルシウム流入（SOCE）を開始する。このカルシウムシグナル伝達軸は、細胞質Ca2+のオシレーションを協調的に制御し、カルシニューリン–NFATやMAPKシグナル伝達などの経路を介して、転写プログラム、細胞骨格リモデリング、分泌、ならびに細胞周期進行を調節する。STIM1依存的なSOCEは、免疫細胞の活性化を規定する中心的要因であると同時に、多くの組織におけるより広範なカルシウム恒常性にも重要な役割を担う。STIM1活性やCa2+流入動態の破綻は、炎症シグナルの変化、神経筋機能、さらには遊走や代謝適応といったがん関連表現型と関連付けられており、疾患モデリングにおける機序的な結節点としての有用性を裏付けている。

Stim1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STIM1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Stim1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STIM1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTIM1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Stim1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTIM1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるStim1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTIM1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるStim1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。