STEP Double Nickaseプラスミド (h): sc-407340-NIC

プロテインチロシンホスファターゼ非受容体型5（PTPN5、別名STEP）は、脳に豊富に発現するホスファターゼであり、ERK1/2 MAPKやNMDA受容体関連タンパク質などの主要な神経細胞基質を脱リン酸化することで、シナプスシグナル伝達を調節します。グルタミン酸作動性受容体のリン酸化依存的な輸送（トラフィッキング）と活性を制御することを通じて、STEPはシナプス可塑性、学習、記憶に関連するシグナル伝達に影響を与えます。PTPN5の活性はMAPK/ERK経路や受容体エンドサイトーシス経路と交差し、刺激依存的な神経応答を形作ります。STEPシグナルの調節異常は、神経変性疾患および神経精神疾患の研究文脈においてシナプス機能の変化と関連づけられており、PTPN5はホスファターゼ依存的な回路メカニズムを解明するための有用な標的となっています。

STEP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PTPN5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PTPN5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PTPN5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PTPN5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。