STC1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423182-ACT

スタニオカルシン1（STC1）は、マウスのStc1遺伝子にコードされる分泌型糖タンパク質ホルモンであり、カルシウムおよびリン酸の恒常性維持に加えて、より広範なストレス適応シグナル伝達に関与するとされています。STC1は低酸素や炎症に関連するプログラムによって制御され、ミトコンドリア機能の調節、酸化ストレス応答、細胞生存経路の制御との関連が報告されています。多様な組織において、STC1は血管新生、代謝、免疫に関わるプロセスに影響を及ぼすため、虚血性障害、線維化、腫瘍関連の微小環境リモデリングの研究において重要な分子です。複数の疾患状況でSTC1発現の変化が観察されており、ストレスシグナルと組織恒常性の間の経路クロストークを解明するための機構的ハブとして利用できることが示唆されています。

STC1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Stc1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

STC1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Stc1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はStc1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性STC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のStc1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSTC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびStc1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSTC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。