Stat5b Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-423179-NIC

A Stat5b (transdutor de sinal e ativador de transcrição 5B) de camundongo é um fator de transcrição responsivo a citocinas que conecta as quinases JAK associadas a receptores a mudanças rápidas na expressão gênica. Após a fosforilação, o STAT5B dimeriza e se transloca para o núcleo para regular programas que controlam o desenvolvimento de linfócitos, a diferenciação mieloide, o metabolismo e a sinalização por fatores de crescimento, com papéis de destaque a jusante de citocinas da família da IL-2 e do hormônio do crescimento. A atividade de Stat5b se cruza com circuitos de retroalimentação da via JAK–STAT, remodelamento de cromatina e controle transcricional de genes de sobrevivência e do ciclo celular. A sinalização desregulada de STAT5B é frequentemente estudada em modelos de desequilíbrio imune, inflamação e transformação hematopoética, nos quais alterações nos resultados transcricionais podem mudar o destino de linhagem e a capacidade proliferativa.

Stat5b O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Stat5b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Stat5b. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Stat5b. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Stat5b interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.