Stat3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423176-ACT

シグナル伝達兼転写活性化因子3（Stat3）は、マウス細胞における中心的な転写因子であり、サイトカイン受容体および増殖因子受容体からのシグナルを核へ伝達する。とりわけIL-6ファミリーのシグナル伝達において、JAKキナーゼの下流で重要な役割を担う。活性化されたStat3は、増殖・生存・分化・炎症応答を制御する遺伝子プログラムを調節し、MAPK経路やPI3K–AKT経路とのクロストークを統合する。Stat3活性は免疫細胞の分極や組織恒常性にも影響し、STAT3シグナルの破綻は、炎症、線維化、代謝ストレス、腫瘍性の転写ネットワークにおいて広く研究されている。さらに神経系や幹細胞／前駆細胞の文脈では、Stat3は系譜決定やストレス応答性の転写にも寄与する。

Stat3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Stat3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Stat3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Stat3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はStat3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Stat3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のStat3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるStat3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびStat3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるStat3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。