Stat3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423176-ACT

O transdutor de sinal e ativador de transcrição 3 (Stat3) é um fator de transcrição central em células de camundongo que transmite sinais de receptores de citocinas e de fatores de crescimento até o núcleo, sobretudo a jusante das quinases JAK após a sinalização da família IL-6. Quando ativado, o Stat3 regula programas gênicos que controlam proliferação, sobrevivência, diferenciação e respostas inflamatórias, integrando a comunicação cruzada com as vias MAPK e PI3K–AKT. A atividade de Stat3 influencia a polarização de células imunes e a homeostase tecidual, e a sinalização de STAT3 desregulada é amplamente estudada em inflamação, fibrose, estresse metabólico e redes transcricionais oncogênicas. No sistema nervoso e em contextos de células-tronco/progenitoras, o Stat3 também contribui para decisões de linhagem e para a transcrição responsiva ao estresse.

Stat3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Stat3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Stat3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Stat3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Stat3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Stat3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Stat3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Stat3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Stat3 em células tumorais com expressão de Stat3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.