Stat1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400086-NIC

STAT1は、細胞質に潜在的に存在する転写因子Stat1をコードしており、I型、II型、およびIII型インターフェロン受容体の下流で、JAKによるリン酸化を介して活性化されます。リン酸化されたStat1はホモ二量体、または（STAT2などとの）ヘテロ二量体を形成し、核内へ移行して、抗ウイルス防御、抗原提示、細胞内在性の免疫監視に関与するインターフェロン誘導遺伝子の発現を制御します。このシグナル伝達軸はNF-κBなどの炎症性ネットワークとも統合され、アポトーシス、細胞周期制御、代謝適応といった細胞プログラムを再編成し得ます。STAT1活性の制御異常は、宿主—病原体応答の変化や免疫介在性の病態と関連し、炎症、感染生物学、腫瘍—免疫相互作用の研究で頻繁に解析対象となっています。

Stat1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における STAT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、STAT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、STAT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、STAT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。