Stat1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400086-ACT

ヒトSTAT1遺伝子は、インターフェロンα/βおよびインターフェロンγシグナル伝達における中心的な転写因子であるStat1をコードしている。Stat1はJAKによるリン酸化で活性化され、サイトカイン受容体の下流で機能する。活性化するとStat1は二量体を形成して核内へ移行し、抗ウイルス防御、抗原提示、アポトーシス、細胞周期の抑制を制御するインターフェロン刺激遺伝子の発現を調節する。STAT1は、NF-κBやIRFネットワークとのクロストークを含む自然免疫と獲得免疫の経路を統合し、炎症応答の出力や免疫監視を形作る。STAT1活性の制御異常は、感染症への感受性、慢性炎症、腫瘍における免疫回避などに関与することが示されており、免疫シグナル伝達や転写プログラムを解析するための重要な標的（ノード）として広く用いられている。

Stat1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STAT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Stat1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STAT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTAT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Stat1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTAT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるStat1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTAT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるStat1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。