StARD4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403624-ACT

O gene humano **STARD4** codifica a **StARD4**, uma proteína de transferência de lipídios com domínio START que se liga ao colesterol e sustenta o tráfego de esteróis sem vesículas entre membranas intracelulares. A StARD4 contribui para a homeostase do colesterol ao influenciar a distribuição de esteróis que alimenta o sensoriamento e o controle biossintético baseados no RE, incluindo nós regulatórios em vias metabólicas lipídicas dependentes de SREBP. Ao moldar os estoques celulares de colesterol, a StARD4 pode afetar a composição de membranas, a dinâmica de gotículas lipídicas e processos de sinalização ligados à adaptação metabólica. O manuseio desregulado do colesterol é relevante para fenótipos cardiometabólicos e respostas de estresse associadas a lipídios, tornando o **STARD4** um alvo útil para estudos mecanísticos de biologia de esteróis e vias relacionadas a doenças.

StARD4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STARD4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

StARD4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STARD4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STARD4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de StARD4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STARD4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de StARD4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via StARD4 em células tumorais com expressão de STARD4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.