STAM CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402697-ACT

ヒトSTAM（signal transducing adaptor molecule）は、ESCRT-0複合体内で機能するエンドソームアダプターであり、HGS/Hrsと協調してユビキチン化カーゴを認識し、受容体をリソソーム分解へと向かわせるソーティングを統御する。STAMはVHSドメインおよびSH3ドメインを介して、ユビキチン依存的なトラフィッキングと、増殖因子・サイトカイン受容体シグナルの下流調節を結び付け、MAPKおよびJAK/STAT経路のシグナル強度と持続時間に影響を与える。この制御は、エンドサイトーシス、エンドソーム成熟、プロテオスタシスといった中心的プロセスに関わり、これらはがん生物学や免疫シグナル伝達においてしばしば変化する。STAM依存的な受容体ターンオーバーの破綻は、異常なシグナルの持続や細胞応答性の変化と関連付けられており、STAMはトラフィッキングとシグナル伝達のクロストークを解析するうえで有用な結節点となる。

STAM CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STAMの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

STAM CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STAM 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTAM転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性STAMの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTAM遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSTAM依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTAM発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSTAM経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。