ST2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402390-ACT

A IL1RL1 humana codifica a ST2, um membro da família de receptores de interleucina-1 que atua como receptor de sinalização para a IL-33 e participa da regulação imune inata e adaptativa. A ativação de ST2 aciona vias dependentes de MyD88, levando à sinalização por NF-κB e MAPK, moldando a produção de citocinas, o recrutamento celular e as respostas de remodelação tecidual. O eixo IL-33/ST2 está implicado na inflamação do tipo 2 e na homeostase imune, com relevância para contextos de inflamação das vias aéreas, biologia de doenças alérgicas e inflamação cardiovascular. A sinalização desregulada de ST2 também tem sido estudada em cenários de inflamação crônica, nos quais a comunicação cruzada entre células epiteliais e imunes influencia programas transcricionais associados à doença.

ST2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL1RL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ST2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL1RL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL1RL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ST2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL1RL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ST2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ST2 em células tumorais com expressão de IL1RL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.