SSc5D CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418823-ACT

SSC5Dは、複数のSRCRドメインをもつヒトのスカベンジャー受容体システインリッチ（SRCR）ファミリーのメンバーであるSSc5Dをコードしており、自然免疫の監視に関与するパターン認識・細胞間相互作用タンパク質として知られています。SSc5Dは炎症シグナルの調節や白血球の活性化状態の制御との関連が示されており、宿主―微生物相互作用や組織の免疫恒常性を司る経路と結び付けられています。骨髄系系譜や免疫関連の文脈における発現パターンから、SSC5Dは抗原提示細胞機能、サイトカイン応答、免疫細胞トラフィッキングを形作る機構の研究において重要な標的となります。SSC5Dの発現異常は炎症性疾患や免疫関連疾患の状況で報告されており、疾患に関連した免疫表現型を解明するための分子学的な入口として有用であることが示唆されています。

SSc5D CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SSC5Dの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SSc5D CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SSC5D 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSSC5D転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SSc5Dの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSSC5D遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSSc5D依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSSC5D発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSSc5D経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。