SRPK1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402855-NIC

SRPK1 codifica a quinase 1 específica de proteínas ricas em serina/arginina (SR), um regulador conservado do splicing do pré‑mRNA que fosforila fatores de splicing SR para controlar sua localização e atividade. Ao modular a escolha de sítios de splicing e a inclusão de éxons, a SRPK1 influencia programas de expressão gênica ligados à progressão do ciclo celular, respostas ao estresse e saídas de sinalização que dependem do splicing alternativo. A atividade de SRPK1 se integra a vias de processamento de RNA dependentes de fosforilação e pode remodelar paisagens de isoformas de transcritos, afetando apoptose, proliferação e dinâmica do citoesqueleto. A desregulação do controle de splicing mediado por SRPK1 tem sido associada a fenótipos relevantes para doenças em biologia do câncer, neurodegeneração e mecanismos relacionados à angiogênese, sustentando seu uso como alvo para estudos mecanísticos da regulação dependente de splicing.

SRPK1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SRPK1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SRPK1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SRPK1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SRPK1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.