SREBP-2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423153-ACT

Il gene murino **Srebf2** codifica la proteina 2 legante l’elemento regolatore degli steroli (**SREBP-2**), un fattore di trascrizione ancorato alla membrana che viene attivato proteoliticamente in risposta a una riduzione dei livelli intracellulari di steroli. Una volta attivato, SREBP-2 trasloca nel nucleo e induce l’espressione di geni che regolano la biosintesi e l’assorbimento del colesterolo, inclusi componenti chiave della via del mevalonato e dell’omeostasi del colesterolo mediata dal recettore delle LDL. Questo asse regolatorio coordina la disponibilità di lipidi con la biogenesi delle membrane e il rimodellamento metabolico, intersecando i segnali di stress del reticolo endoplasmatico (RE) e i meccanismi di controllo a feedback del sensing degli steroli. Un’attività deregolata di SREBP-2 è stata associata a fenotipi di metabolismo lipidico alterato e contribuisce agli studi meccanicistici di vie rilevanti per malattie cardiometaboliche ed epatiche in modelli murini.

SREBP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Srebf2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SREBP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Srebf2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Srebf2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SREBP-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Srebf2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SREBP-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SREBP-2 nelle cellule tumorali con espressione di Srebf2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.