SRA Double Nickaseプラスミド (h): sc-404308-NIC

SRA1は、ステロイド受容体RNAアクチベーター1（SRA）をコードしており、SRAは核内受容体や他の転写因子によって制御される転写プログラムを調節する、多機能なRNA／タンパク質共制御因子です。SRAはクロマチンリモデリングや転写複合体の組み立てに関与し、ホルモン応答性遺伝子の発現に影響を与えることで、ステロイドシグナル伝達を、より広範なエピジェネティックおよびRNA介在性の制御過程と結び付けます。これらの作用を通じて、SRA1は細胞分化、代謝制御、ストレス応答性の転写出力を司る経路と関連付けられています。SRA1／SRAの発現異常は、ホルモン関連疾患や増殖性疾患のさまざまな状況で報告されており、転写ネットワークの攪乱を解明するための機序的標的としての有用性が示唆されています。

SRA ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SRA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SRA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SRA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SRA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。