SR-5A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404950-ACT

HTR5A codifica il recettore umano della 5-idrossitriptamina 5A (SR-5A), un recettore accoppiato a proteine G responsivo alla serotonina che modula la segnalazione intracellulare mediata da secondi messaggeri e l’eccitabilità neuronale. L’attività di SR-5A contribuisce alla neurotrasmissione serotoninergica e può influenzare a valle la segnalazione di chinasi, i programmi trascrizionali e i processi legati alla plasticità sinaptica. Un’alterata regolazione delle vie recettoriali serotoninergiche è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici, inclusi endofenotipi collegati all’umore e alla cognizione, rendendo HTR5A un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla biologia dei circuiti neurali e della trasduzione del segnale.

SR-5A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HTR5A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SR-5A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HTR5A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HTR5A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SR-5A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HTR5A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SR-5A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SR-5A nelle cellule tumorali con espressione di HTR5A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.