SR-1D Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404213-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- SR-1DO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase SR-1D (h) e o Plasmídeo Double Nickase SR-1D (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para HTR1D. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:SR-1D Anticorpo (H-4): sc-398809
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
SR-1D Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404213-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SR-1D Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404213-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HTR1D codifica o recetor humano de serotonina (5-hidroxitriptamina) 1D (SR-1D), um GPCR acoplado a Gi/o que atenua a atividade da adenilato ciclase e reduz o cAMP intracelular para modular a excitabilidade neuronal e a libertação sináptica de neurotransmissores. A sinalização do SR-1D influencia as vias MAPK/ERK e a regulação de canais iónicos a jusante do tónus serotoninérgico, moldando o controlo pré-sináptico da transmissão de monoaminas nos sistemas nervosos central e periférico. Este recetor é estudado em vias que regulam a função neurovascular e o processamento nociceptivo, e alterações na sinalização de GPCRs serotoninérgicos têm sido associadas a mecanismos de doença neurológica, incluindo a biologia da enxaqueca e fenótipos relacionados de cefaleias. A perturbação de HTR1D também é usada para investigar a dessensibilização de GPCRs, o tráfego mediado por β-arrestina e a regulação, ao nível de circuitos, de redes responsivas à serotonina.
SR-1D O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HTR1D em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HTR1D. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HTR1D. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HTR1D interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.