Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Squalene synthetase Double Nickaseプラスミド (h): sc-403845-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Squalene synthetase Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Squalene synthetaseダブルニカースプラスミド（h）およびSqualene synthetaseダブルニカースプラスミド（h2）は、FDFT1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Squalene synthetase 抗体 (A-7): sc-271602
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Squalene synthetase Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403845-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Squalene synthetase Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403845-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FDFT1 はスクアレン合成酵素をコードしており、同酵素は小胞体に局在する酵素として、ファルネシル二リン酸（FPP）2分子をスクアレンへと変換することで、ステロール生合成における最初の不可逆的（コミット）段階を触媒します。この反応はメバロン酸経路を下流のコレステロール産生へと結び付け、膜の生合成、脂質ラフトの形成・維持、ならびにステロイド由来代謝産物の合成を協調的に制御します。ステロール合成へのフラックスを制御することで、スクアレン合成酵素は細胞の脂質恒常性や、コレステロール応答性の転写プログラムにおけるフィードバック制御にも影響を及ぼします。FDFT1 依存的なステロール代謝の破綻は、代謝・心血管領域、生物学的神経研究、ならびにメバロン酸経路活性が変化する増殖状態など、さまざまな文脈で検討されています。
Squalene synthetase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FDFT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FDFT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FDFT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FDFT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。