Sptrx-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413575-ACT

ヒトTXNDC2は、精子特異的なチオレドキシン（thioredoxin）ドメイン含有タンパク質Sptrx-1をコードしており、男性生殖細胞系列に豊富に存在するレドックス活性因子として、精子細胞（spermatid）成熟過程におけるチオール–ジスルフィド交換を支えます。Sptrx-1は、精子頭部の形態形成、クロマチンのパッケージング、鞭毛構造を基盤から支える酸化的タンパク質フォールディングおよびジスルフィド結合の再編成に寄与し、細胞のレドックス恒常性やタンパク質品質管理（プロテオスタシス）過程と結び付いています。発生途上の生殖細胞におけるレドックスバランスの破綻は精子機能低下と関連し、TXNDC2活性の変化は男性不妊や酸化ストレス関連の生殖表現型の文脈で研究されてきました。精巣偏在性のレドックス調節因子として、TXNDC2は、チオレドキシン依存性経路が精子形成および生殖細胞のストレス耐性にどのように影響するかを解析するうえで、検証しやすい標的（ノード）となります。

Sptrx-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TXNDC2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sptrx-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TXNDC2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTXNDC2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sptrx-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTXNDC2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSptrx-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTXNDC2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSptrx-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。