SPT6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406219-ACT

ヒトSUPT6HはSPT6をコードしており、リン酸化されたRNAポリメラーゼIIのCTDに結合し、転写が活発に行われている際のヌクレオソーム再構築を協調的に制御する、保存性の高い転写伸長因子／クロマチン関連因子である。SPT6はIWS1/ALYREFなどの因子と協働して、伸長過程とスプライシングやRNA輸送を含む共転写的mRNAプロセシングを連結し、転写の忠実性とゲノム安定性の維持に寄与する。クロマチン構造と伸長ダイナミクスの制御を通じて、SUPT6Hは細胞アイデンティティ、増殖、ストレス応答に関わる広範な遺伝子発現プログラムに影響を与える。SPT6依存的な転写制御の破綻は、異常な腫瘍性シグナル伝達や分化状態の変化に関与することが示唆されており、転写依存（transcriptional addiction）やエピジェネティックな脆弱性の機構研究における有用な結節点となる。

SPT6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SUPT6Hの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SPT6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SUPT6H 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSUPT6H転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SPT6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSUPT6H遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSPT6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSUPT6H発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSPT6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。