SPPL2b CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405646-ACT

ヒトのSPPL2Bは、膜内アスパラギン酸プロテアーゼであるSPPL2bをコードしている。SPPL2bはシグナルペプチドペプチダーゼ様酵素で、脂質二重層内において特定のII型膜タンパク質を切断する。基質のターンオーバーや膜タンパク質断片のシグナル伝達を制御することで、SPPL2bはプロテオスタシス、エンドソーム／リソソーム輸送、ならびに細胞間コミュニケーションを形作る受容体関連のプロセシング事象に寄与する。SPPL2bの活性は、タンパク質品質管理や免疫に関わる膜動態を制御する経路とも交差しており、膜内プロテオリシスがシグナル出力を調節し得る炎症制御や神経生物学の研究において重要である。膜タンパク質のプロセシングと輸送の破綻は複雑な疾患でしばしば示唆されることから、SPPL2Bは疾患関連の細胞モデルにおける機序解明のための有用なノードとして位置づけられる。

SPPL2b CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SPPL2Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SPPL2b CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SPPL2B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSPPL2B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SPPL2bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSPPL2B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSPPL2b依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSPPL2B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSPPL2b経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。