Partículas Lentivirales de Activación (h) SPNS2: sc-405481-LAC

SPNS2 (homólogo 2 de *spinster*) codifica un transportador de membrana multipaso que exporta esfingosina-1-fosfato (S1P), un mediador lipídico bioactivo que configura gradientes extracelulares de S1P y la señalización a través de los receptores S1PR. Al controlar la disponibilidad de S1P, SPNS2 influye en procesos como el tráfico de células inmunitarias, la biología vascular y endotelial y la función de barrera, en conexión con el metabolismo de los esfingolípidos y con vías impulsadas por GPCR como la señalización PI3K–AKT y MAPK. La actividad alterada de SPNS2 puede perturbar la homeostasis de S1P y se ha asociado con fenotipos inflamatorios y respuestas inmunitarias desreguladas en contextos relevantes para enfermedades. Por ello, SPNS2 se estudia con frecuencia para analizar la regulación de los transportadores lipídicos y la comunicación dependiente de S1P entre los tejidos y las células inmunitarias circulantes.

Las partículas de activación lentiviral SPNS2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SPNS2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SPNS2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SPNS2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SPNS2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SPNS2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.