spectrin α I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403563

Panoramica

SPTA1 codifica la spettina α I umana, un componente fondamentale dello scheletro di membrana dell’eritrocita che forma eterodimeri con la β-spettina per assemblare una rete a reticolo che sostiene la stabilità e la deformabilità della membrana. Questa rete citoscheletrica collega le proteine integrali di membrana al complesso giunzionale basato sull’actina, coordinando la resilienza meccanica durante ripetuti cicli di stress da taglio nella circolazione. L’alterazione dell’architettura della spettina compromette il mantenimento della forma dei globuli rossi e l’integrità di membrana, influenzando processi quali il traffico di membrana, il rimodellamento del citoscheletro e l’omeostasi ionica. La variabilità genetica o la carenza di SPTA1 è associata a malattie ereditarie della membrana dei globuli rossi, tra cui la sferocitosi ereditaria e l’ellittocitosi, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio delle relazioni genotipo–fenotipo nella biologia eritroide.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO spectrin α I (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPTA1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPTA1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPTA1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina spectrin α I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPTA1 per lo studio della segnalazione di spectrin α I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SPTA1 critici per la funzione di spectrin α I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPTA1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal spectrin α I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal spectrin α I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPTA1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal spectrin α I Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR spectrin α I (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPTA1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPTA1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.