Plasmide CRISPR d'Activation (h) SPATA18: sc-407015-ACT

Le gène humain **SPATA18** code un facteur associé aux mitochondries, impliqué dans le contrôle qualité mitochondrial et l’élimination, en réponse au stress, des mitochondries endommagées via des processus de type mitophagie. Il est lié aux réponses cellulaires au stress oxydatif et au maintien de l’intégrité de la membrane mitochondriale, reliant l’activité de SPATA18 à des voies plus larges qui régulent le métabolisme énergétique, l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et le renouvellement des organites. Une régulation altérée de SPATA18 a été rapportée dans des contextes de stress cellulaire et de programmes de maintenance du génome, ce qui le rend pertinent pour l’étude de la dysfonction mitochondriale et de phénotypes associés à la prolifération. Ces fonctions font de SPATA18 un nœud utile pour explorer la manière dont la surveillance mitochondriale s’articule avec les décisions de destin cellulaire et le remodelage métabolique associé aux maladies.

SPATA18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SPATA18 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SPATA18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SPATA18 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SPATA18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SPATA18. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SPATA18 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SPATA18 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SPATA18 dans les cellules tumorales présentant une expression de SPATA18 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.