Spastin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402225-ACT

ヒトの **SPAST** は、AAA ATPアーゼ型の微小管切断酵素である **スパスチン（spastin）** をコードしており、微小管格子からチューブリンのサブユニットを引き抜くことで微小管細胞骨格を再編成します。スパスチンは、軸索の維持、エンドソームおよび小胞体（ER）の輸送、膜分裂イベントを支え、神経突起の伸長や細胞内輸送を形作る細胞骨格ダイナミクスと統合的に機能します。これらの役割を通じて、SPAST は長距離投射ニューロンにおけるオルガネラ分布や神経回路の連結性を制御する経路に影響を与えます。スパスチン活性の破綻や喪失は遺伝性痙性対麻痺と強く関連しており、軸索障害や神経変性に伴う輸送異常のモデルで頻繁に研究されています。

Spastin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SPASTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Spastin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SPAST 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSPAST転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Spastinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSPAST遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSpastin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSPAST発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSpastin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。