Spartin Double Nickaseプラスミド (h): sc-407769-NIC

SPG20はSpartin（スパルチン）をコードしており、Spartinは細胞質に存在するタンパク質で、ESCRT機構の構成要素やユビキチン依存的なソーティング経路の因子との相互作用を介して、エンドソーム輸送および膜動態に関与すると考えられています。Spartinは脂質滴のターンオーバーやミトコンドリアの恒常性の制御とも関連づけられており、プロテオスタシスやオルガネラ機能に影響する細胞内品質管理プロセスと統合的に関わります。SPG20の機能障害は、神経発達および運動系の障害を特徴とする複雑型の遺伝性痙性対麻痺であるトロイヤー症候群と関連しており、Spartinは神経系に関連した輸送機構やストレス応答機構を研究するうえで有用なターゲット（ノード）となります。細胞モデルでは、SPG20を撹乱することで、エンドリソソーム経路のルーティングやオルガネラ維持の変化がシグナル伝達および細胞生存にどのような影響を与えるかを検討できます。

Spartin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SPG20 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SPG20内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SPG20の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SPG20が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。