Particules Lentivirales d'Activation (h) SP140: sc-409816-LAC

SP140 (humain) code une protéine nucléaire lectrice de la chromatine, exprimée principalement dans les cellules immunitaires, où elle aide à interpréter les marques épigénétiques afin de coordonner des programmes transcriptionnels spécifiques de lignée. La protéine SP140 contient des domaines associés à la liaison à la chromatine et à la régulation transcriptionnelle, ce qui la relie au contrôle des réseaux de gènes inflammatoires et de l’état de différenciation au sein des compartiments myéloïde et lymphoïde. En modulant l’activité des enhancers et des promoteurs, SP140 contribue à des voies impliquées dans la signalisation des cytokines, l’activation de l’immunité innée et les réponses antimicrobiennes. Des études génétiques et d’expression ont associé une dérégulation de SP140 à la susceptibilité aux maladies à médiation immunitaire, ce qui en fait une cible utile pour disséquer les mécanismes épigénétiques qui façonnent les phénotypes inflammatoires.

Les particules d'activation lentivirales SP140 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SP140 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SP140 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SP140, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SP140. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SP140 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.