Sox10 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400129-NIC

SOX10は、SRY-box転写因子Sox10をコードしており、神経堤の発生における系譜決定的な制御因子として、シュワン細胞、オリゴデンドロサイト、メラノサイトの分化および維持プログラムを制御します。Sox10は、グリア系譜の運命決定、髄鞘化、色素細胞生物学に関わる遺伝子発現ネットワークを統合的に調節し、WntやNotchなどの発生シグナル入力と連携して、細胞のアイデンティティと成熟を形成します。SOX10依存的な転写回路の破綻は、神経堤病（neurocristopathy）の表現型と関連し、末梢神経系の機能や色素形成に影響する先天性疾患、ならびにメラノーマの生物学にも関与することが示唆されています。ヒトのモデル系において、SOX10は転写制御、細胞状態遷移、発生における遺伝子制御ネットワークを研究するうえでの重要な結節点として位置づけられています。

Sox10 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SOX10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SOX10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SOX10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SOX10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。