SOSTDC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403398-ACT

ヒトの **SOSTDC1** は、スクレロスチンドメイン含有タンパク質1をコードしており、BMPおよびWntシグナル伝達の分泌性アンタゴニストとして、受容体―リガンド相互作用を調節して経路活性を抑制します。BMPによって駆動されるSMADシグナルを減衰させ、βカテニン依存的転写にも影響を及ぼすことで、SOSTDC1は発生パターニング、骨芽細胞分化、ならびに組織恒常性の制御に寄与します。SOSTDC1の発現変化は、がんや線維化、組織リモデリングに関連する状態など、増殖因子シグナルの破綻がみられる複数の状況で報告されており、そこではBMP/Wntのバランスが増殖、分化、細胞外マトリックス関連プログラムに影響します。可溶性の経路調節因子として、傍分泌シグナル、上皮―間葉クロストーク、そして微小環境依存的な表現型の観点からもしばしば研究されています。

SOSTDC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SOSTDC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SOSTDC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SOSTDC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSOSTDC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SOSTDC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSOSTDC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSOSTDC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSOSTDC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSOSTDC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。