Sos 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423075-ACT

O gene Sos1 de camundongo codifica o Son of sevenless homolog 1 (SOS1), um fator de troca de nucleotídeos de guanina que ativa RAS ao promover a troca de GDP por GTP, iniciando assim as cascatas de sinalização RAF–MEK–ERK e outras relacionadas à via MAPK. Por meio de sua regulação a jusante de receptores tirosina-quinase e de proteínas adaptadoras como a GRB2, o SOS1 coordena programas de proliferação, diferenciação e sobrevivência, e contribui para a remodelação do citoesqueleto via comunicação cruzada com redes de pequenas GTPases. A sinalização SOS1–RAS alterada é amplamente relevante para a desregulação do controle de crescimento e para fenótipos do desenvolvimento, tornando o Sos1 um nó amplamente utilizado no estudo da transdução de sinais e das relações genótipo-fenótipo. Em modelos murinos, a perturbação de Sos1 sustenta estudos mecanísticos de feedback de vias, da dinâmica de sinalização dirigida por receptores e de respostas transcricionais específicas de contexto.

Sos 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sos1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sos 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sos1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sos1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sos 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sos1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sos 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sos 1 em células tumorais com expressão de Sos1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.