Somatostatin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400280-ACT

ヒトSSTはソマトスタチンをコードしており、ソマトスタチンは神経系および内分泌組織に広く発現するペプチドホルモンで、成長ホルモン、インスリン、グルカゴン、ならびに複数の消化管ホルモンの分泌を抑制します。ソマトスタチンは主としてGタンパク質共役型のソマトスタチン受容体（SSTR1～SSTR5）を介してシグナルを伝達し、Gi/oを介したアデニル酸シクラーゼの抑制、イオンチャネルの調節、さらに下流のMAPKおよびPI3K経路の制御を通じて、興奮性、分泌、細胞増殖を調整します。神経内分泌および膵臓の文脈では、SSTは膵島ホルモン放出の傍分泌的制御や、ストレス応答性の神経内分泌シグナル伝達に寄与します。ソマトスタチンシグナルの制御異常は、代謝恒常性、神経内分泌分化、ならびにホルモン駆動性疾患の生物学に関する研究において重要であり、膵島機能不全や神経内分泌腫瘍の表現型モデルなどにも関連します。

Somatostatin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SSTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Somatostatin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SST 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSST転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Somatostatinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSST遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSomatostatin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSST発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSomatostatin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。