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SOAT2CRISPR激活质粒(h) | sc-409713-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
SOAT2CRISPR激活质粒(h2) | sc-409713-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
人源 SOAT2(sterol O-acyltransferase 2,固醇 O-酰基转移酶 2),又称 ACAT2,是一种定位于内质网的酶,催化胆固醇与长链脂酰辅酶 A(fatty acyl-CoA)的酯化反应,生成胆固醇酯。该反应支持细胞内胆固醇储存、脂滴生物发生以及脂蛋白组装,使 SOAT2 的活性与固醇稳态及更广泛的脂质代谢网络相连接。SOAT2 位于胆固醇转运、肠道吸收与肝脏脂质处理的交汇处,影响调控膜脂组成与中性脂质缓冲的相关通路。胆固醇酯代谢失衡及 SOAT2 表达改变与代谢性疾病和心血管疾病相关表型有关,因此 SOAT2 也是研究脂质驱动的细胞应激与重塑机制的有用靶点。
SOAT2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SOAT2的表达。
SOAT2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SOAT2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SOAT2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SOAT2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SOAT2位点,并能够研究内源性位点上依赖于SOAT2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SOAT2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SOAT2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。