SNAT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426728

Panoramica

Slc38a2 codifica il trasportatore murino di amminoacidi neutri accoppiato al sodio SNAT2 (SLC38A2), un trasportatore del sistema A che media l’assorbimento di piccoli amminoacidi neutri come glutammina, alanina e serina in modo dipendente da Na⁺. SNAT2 sostiene il sensing cellulare dei nutrienti e l’adattamento metabolico, collegando la disponibilità di amminoacidi a programmi responsivi allo stress, inclusi l’asse della risposta integrata allo stress/ATF4 e la conseguente regolazione della segnalazione mTORC1. Modellando i pool intracellulari di amminoacidi, SNAT2 influenza l’equilibrio redox, la bioenergetica e la sintesi proteica in cellule in proliferazione e in differenziamento. La disregolazione del trasporto di amminoacidi e della gestione della glutammina è spesso studiata in contesti quali il rimodellamento metabolico, la funzione delle cellule immunitarie e la biologia del cancro, rendendo Slc38a2 un nodo utile per indagare fenotipi dipendenti dai nutrienti in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SNAT2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc38a2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc38a2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc38a2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SNAT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc38a2 per lo studio della segnalazione di SNAT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc38a2 critici per la funzione di SNAT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc38a2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SNAT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SNAT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc38a2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SNAT2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SNAT2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc38a2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc38a2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.