SNAT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426728

概要

Slc38a2 は、マウスのナトリウム共役中性アミノ酸トランスポーター SNAT2（SLC38A2）をコードする。SNAT2 は system A トランスポーターであり、Na⁺ 依存的にグルタミン、アラニン、セリンなどの小さな中性アミノ酸の取り込みを媒介する。SNAT2 は細胞の栄養感知と代謝適応を支え、アミノ酸の利用可能性を、統合ストレス応答（integrated stress response）/ATF4 軸を含むストレス応答プログラムや、その下流にある mTORC1 シグナル伝達の制御へと結び付ける。細胞内アミノ酸プールを形成することで、SNAT2 は増殖・分化する細胞におけるレドックスバランス、バイオエネルギー、タンパク質合成に影響を与える。アミノ酸輸送やグルタミンの取り扱いの破綻は、代謝リモデリング、免疫細胞機能、がん生物学などの文脈で一般的に研究されており、Slc38a2 はマウスモデルで栄養依存的な表現型を検証するための有用な結節点となる。

SNAT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSlc38a2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Slc38a2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Slc38a2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SNAT2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SNAT2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Slc38a2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SNAT2の機能に不可欠なSlc38a2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Slc38a2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SNAT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSNAT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc38a2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SNAT2 HDRプラスミド（m）および SNAT2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSlc38a2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSlc38a2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。