Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SNAP 25 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423048-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SNAP 25 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SNAP 25ダブルニカースプラスミド（m）およびSNAP 25ダブルニカースプラスミド（m2）は、Snap25を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: SNAP 25 抗体 (SP12): sc-20038
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SNAP 25 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-423048-NIC | 20 µg | $410.00 |
Snap25は、神経伝達物質放出時のシナプス小胞のドッキングおよびカルシウム誘発性の膜融合を駆動する神経型SNARE複合体の中核構成因子である、シナプトソーム関連タンパク質25（SNAP25）をコードします。SNAP25はsyntaxinおよびVAMP／synaptobrevinと協調して、興奮性回路・抑制性回路の双方におけるシナプス前終末でのエキソサイトーシス、短期シナプス可塑性、ならびに活動依存的な小胞リサイクリングを制御します。SNAP25依存的なシグナル伝達は、神経細胞の興奮性やネットワーク発達を制御する経路とも交差するため、Snap25はマウスモデルでシナプス伝達機構を検討するために広く用いられる遺伝子座です。遺伝学的研究および機能解析研究により、SNAP25の発現変化やSNARE機能の異常が神経発達・神経精神疾患様の表現型と関連することが示されており、回路機能不全の研究における重要性が支持されています。
SNAP 25 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Snap25 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Snap25内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Snap25の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Snap25が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。